大鼠Elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬生長激素(GH)水平。用純化的豬生長激素(GH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入生長激素(GH),再與HRP標(biāo)記的生長激素(GH)抗體結(jié)合,大鼠Elisa試劑盒形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的生長激素(GH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中豬生長激素(GH)濃度。
大鼠Elisa試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,大鼠Elisa試劑盒然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。豬ELISA試劑盒小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
現(xiàn)在市場上的大鼠Elisa試劑盒質(zhì)量參差不齊,各類生物公司扎堆,如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要,具體我們總結(jié)有以下幾點可供參考:
一、特異性,大鼠Elisa試劑盒的特異性與試劑盒的關(guān)鍵組分,抗體對有關(guān),若抗體對中之一為多抗,另一個必須為單抗,建議使用雙單抗。
二、靈敏度,靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力,用戶可根據(jù)自己樣本中待檢指標(biāo)的量選擇合適的試劑盒,如果待檢指標(biāo)量很低,一般的試劑盒不能滿足要求,可選擇高敏的大鼠Elisa試劑盒。
三、重復(fù)性,科學(xué)實驗講求重復(fù)性,一般大鼠Elisa試劑盒,其板內(nèi)和板間變異系數(shù)應(yīng)該控制在15%以內(nèi)。
四、簡便性,試劑盒在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下,實驗時間越短,操作越便利,越容易受到用戶歡迎!這也不妨作為選擇試劑盒的一個指標(biāo)。
五、經(jīng)濟(jì)性,進(jìn)口分裝試劑盒因為省去不少物流和報關(guān)費(fèi)用,與國外*試劑相比價格上有比較大的優(yōu)惠,大鼠Elisa試劑盒而且能提供比較靈活的包裝規(guī)格,特別是48T等小包裝,目前很多客戶因為對品牌的信任度問題,主要還是選擇國外*,但是國內(nèi)進(jìn)口分裝比較成熟的公司仍然是一個非常好的選擇!
大鼠Elisa試劑盒訂單下了,收到貨到運(yùn)用這段時間,也是要好好保存的,要特別注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,大鼠Elisa試劑盒在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色,樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,大鼠Elisa試劑盒一則細(xì)菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾,血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,大鼠Elisa試劑盒如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下,冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可,大鼠Elisa試劑盒在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。