德國(guó)默克試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。 由于ELISA方法靈敏,特異性強(qiáng)不需要特殊設(shè)備,所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,德國(guó)默克試劑盒而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外,有時(shí)??梢?jiàn)到一些錯(cuò)誤結(jié)果(即假陽(yáng)性或假陰性)如標(biāo)本的影響上海勁馬為大家解讀ELISA檢測(cè)的影響因素。
溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性??赡苁侨苎逯泻羞^(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),德國(guó)默克試劑盒在洗滌過(guò)程中往往難以*洗脫,德國(guó)默克試劑盒它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍(lán)色,產(chǎn)生假陽(yáng)性[。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
標(biāo)本受細(xì)菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶,因此,德國(guó)默克試劑盒被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果,標(biāo)本保存不當(dāng)。在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本,在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、造成假陽(yáng)性;為克服上述干擾,德國(guó)默克試劑盒測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測(cè)定,5 d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。
制備德國(guó)默克試劑盒的方法步驟:
1、抗原表位的計(jì)算機(jī)篩選;
2、抗原的制備;
3、血清的采集;
4、間接ELISA方法的建立;
5、間接ELISA方法的敏感性和特異性驗(yàn)證;
6、德國(guó)默克試劑盒的穩(wěn)定性驗(yàn)證;
7、對(duì)屠宰場(chǎng)進(jìn)行臨床檢測(cè)。該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性合格、重復(fù)性好。應(yīng)用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出感染豬的戊型肝炎病毒,德國(guó)默克試劑盒適用于大批量發(fā)病樣本的檢測(cè),可用于豬戊肝的快速診斷,并預(yù)防、控制豬戊肝病毒的流行和阻斷戊肝病毒由豬向人傳播。
塑料試管能吸附抗原物質(zhì),德國(guó)默克試劑盒樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。使用真空采血管;并使用非抗凝標(biāo)本,肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性。標(biāo)本凝固不全。在工作中,有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè),常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在德國(guó)默克試劑盒過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊,易造成假陽(yáng)性結(jié)果;因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。